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荧光分光光度计的基本原理

作者:admin 来源:未知 时间:2021-04-17 02:23:27 点击:

[文章前言]:荧光分光光度计是一种用于扫描液相荧光标记物发出的荧光光谱的仪器。它可以提供许多物理参数,包括激发光谱,发射光谱,荧光强度,量子产率,荧光寿命,荧光偏振等,从各个角

荧光分光光度计是一种用于扫描液相荧光标记物发出的荧光光谱的仪器。它可以提供许多物理参数,包括激发光谱,发射光谱,荧光强度,量子产率,荧光寿命,荧光偏振等,从各个角度反映分子的键合和结构。通过确定这些参数,不仅可以进行一般的定量分析,而且可以推断出分子在各种环境下的构象变化,以阐明分子结构与功能之间的关系。

构成

1.光源:

是高压汞蒸气灯或氙弧灯。后者可以发出强度更高的连续光谱,并且强度在300nm至400nm的范围内几乎相等,因此更常用。

2.激发单色仪:

放置在光源和样品室之间的是激发单色仪或*单色仪,它滤出特定的激发光谱。

3.发射单色仪:

发射单色仪或第二单色仪置于样品室和检测器之间,并且光栅通常用作单色仪。过滤掉特定的发射光谱。

4.样品室:

通常由石英池(用于液体样品)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时,光源和检测器成直角排列;当测量固体时,光源和检测器以锐角布置。

5.检测器:

通常使用光电管或光电倍增管作为检测器。放大光信号并将其转换为电信号

基本的

高压水银灯或氙气灯发出的紫外线和蓝紫色光通过滤光片照射到样品池中,样品中的荧光物质被激发而发出荧光。荧光被过滤并反射后,被光电倍增管接收,然后以数字形式显示或显示。

物质荧光的产生是在正常条件下处于基态的物质分子吸收激发光然后变成激发态,这些处于激发态的分子是不稳定的。在返回基态的过程中,一部分能量返回为光的形式。释放产生荧光。

由于不同物质的分子结构不同,激发态能级的分布具有各自不同的特征。这种特性反映在荧光上,因为各种物质都有自己的荧光激发和发射光谱。因此,可以使用荧光激发和发射光谱。发射光谱的差异用于定性鉴定物质。

在溶液中,当荧光物质的浓度低时,其荧光强度与该物质的浓度通常具有良好的比例关系,即IF=KC。该关系可以用于荧光物质的定量分析和紫外可见光谱。光度法相似,通常通过标准曲线法进行荧光分析。

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